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生物安全柜(Biological safety cabinets,BSCs)是為操作原代培養(yǎng)物、菌毒株以及診斷性標(biāo)本等具有感染性的實(shí)驗(yàn)材料時(shí),用來(lái)保護(hù)操作者本人、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境以及實(shí)驗(yàn)材料,使其避免暴露于上述操作過(guò)程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設(shè)計(jì)的。當(dāng)操作液體或半流體,例如搖動(dòng)、傾注、攪拌,或?qū)⒁后w滴加到固體表面上或另一種液體中時(shí),均有可能產(chǎn)生氣溶膠。在對(duì)瓊脂板劃線(xiàn)接種、用吸管接種細(xì)胞培養(yǎng)瓶、采用多道加樣器將感染性試劑的混懸液轉(zhuǎn)移到微量培養(yǎng)板中、對(duì)感染性物質(zhì)進(jìn)行勻漿及渦旋振蕩、對(duì)感染性液體進(jìn)行離心以及進(jìn)行動(dòng)物操作時(shí),這些實(shí)驗(yàn)室操作都可能產(chǎn)生感染性氣溶膠。由于肉眼無(wú)法看到直徑小于5μm 的氣溶膠以及直徑為5~100μm 的微小液滴,因此實(shí)驗(yàn)室工作人員通常意識(shí)不到有這樣大小的顆粒在生成,并可能吸入或交*污染工作臺(tái)面的其他材料。已經(jīng)表明,正確使用生物安全柜可以有效減少由于氣溶膠暴露所造成的實(shí)驗(yàn)室感染以及培養(yǎng)物交*污染。生物安全柜同時(shí)也能保護(hù)環(huán)境。
多年以來(lái),生物安全柜的基本設(shè)計(jì)已經(jīng)歷了多次改進(jìn)。主要的變化是在排風(fēng)系統(tǒng)增加了HEPA 過(guò)濾器。對(duì)于直徑0.3μm 的顆粒,HEPA 過(guò)濾器可以截留99.97%,而對(duì)于更大或更小的顆粒則可以截留99.99%。HEPA 過(guò)濾器的這種特性使得它能夠有效地截留所有已知傳染因子,并確保從安全柜中排出的是*不含微生物的空氣。生物安全柜設(shè)計(jì)中的第二個(gè)改進(jìn)是將經(jīng)HEPA 過(guò)濾的空氣輸送到工作臺(tái)面上,從而保護(hù)工作臺(tái)面上的物品不受污染。這一特點(diǎn)通常被稱(chēng)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象保護(hù)(product protection )。這些基本設(shè)計(jì)上的變化使得三種的生物安全柜都得到了改進(jìn),表1. 列出了各種安全柜所能提供的保護(hù)。
注:水平和垂直方向流出氣流的工作柜( “超凈工作臺(tái)”)不屬于生物安全柜,也不能應(yīng)用于生物安全操作。
表1.不同保護(hù)類(lèi)型及生物安全柜的選擇
保護(hù)類(lèi)型 | 生物安全柜的選擇 |
個(gè)體防護(hù),針對(duì)危險(xiǎn)度1~3 級(jí)微生物 | Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)生物安全柜 |
個(gè)體防護(hù),針對(duì)危險(xiǎn)度4 級(jí)微生物,手套箱型實(shí)驗(yàn)室 | Ⅲ級(jí)生物安全柜 |
個(gè)體防護(hù),針對(duì)危險(xiǎn)度4 級(jí)微生物,防護(hù)服型實(shí)驗(yàn)室 | Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)生物安全柜 |
實(shí)驗(yàn)對(duì)象保護(hù) | Ⅱ級(jí)生物安全柜,柜內(nèi)氣流是層流的Ⅲ級(jí)生物安全柜 |
少量揮發(fā)性放射性核素∕化學(xué)品的防護(hù) | Ⅱ級(jí)B1 型生物安全柜,外排風(fēng)式Ⅱ級(jí)A2型生物安全柜 |
揮發(fā)性放射性核素∕化學(xué)品的防護(hù) | Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)B2 型、Ⅲ級(jí)生物安全柜 |
Ⅰ級(jí)生物安全柜
房間空氣從前面的開(kāi)口處以0.38 m/s 的低速率進(jìn)入安全柜,空氣經(jīng)過(guò)工作臺(tái)表面,并經(jīng)排風(fēng)管排出安全柜。定向流動(dòng)的空氣可以將工作臺(tái)面上可能形成的氣溶膠迅速帶離實(shí)驗(yàn)室工作人員而被送入排風(fēng)管內(nèi)。操作者的雙臂可以從前面的開(kāi)口伸到安全柜內(nèi)的工作臺(tái)面上,并可以通過(guò)玻璃窗觀察工作臺(tái)面的情況。安全柜的玻璃窗還能*抬起來(lái),以便清潔工作臺(tái)面或進(jìn)行其他處理。
安全柜內(nèi)的空氣可以通過(guò)HEPA 過(guò)濾器按下列方式排出:
(a)排到實(shí)驗(yàn)室中,然后再通過(guò)實(shí)驗(yàn)室排風(fēng)系統(tǒng)排到建筑物外面;
(b) 通過(guò)建筑物的排風(fēng)系統(tǒng)排到建筑物外面;
(c) 直接排到建筑物外面。HEPA 過(guò)濾器可以裝在生物安全柜的壓力排風(fēng)系統(tǒng)(the exhaust plenum )里,也可以裝在建筑物的排風(fēng)系統(tǒng)里。有些Ⅰ級(jí)生物安全柜裝有一體式排風(fēng)扇,而其他的則是借助建筑物排風(fēng)系統(tǒng)的排風(fēng)扇。
Ⅰ級(jí)生物安全柜是早得到認(rèn)可的,并且由于其設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單,目前仍在世界各地廣泛使用。Ⅰ 級(jí)生物安全柜能夠?yàn)槿藛T和環(huán)境提供保護(hù),也可用于操作放射性核素和揮發(fā)性有毒化學(xué)品。但因未滅菌的房間空氣通過(guò)生物安全柜正面的開(kāi)口處直接吹到工作臺(tái)面上,因此Ⅰ級(jí)生物安全柜對(duì)操作對(duì)象不能提供切實(shí)可行的保護(hù)。
Ⅱ級(jí)生物安全柜
在應(yīng)用細(xì)胞和組織培養(yǎng)物來(lái)進(jìn)行病毒繁殖或其他培養(yǎng)時(shí),未經(jīng)滅菌的房間空氣通過(guò)工作臺(tái)面是不符合要求的。Ⅱ級(jí)生物安全柜在設(shè)計(jì)上不但能提供個(gè)體防護(hù),而且能保護(hù)工作臺(tái)面的物品不受房間空氣的污染。Ⅱ級(jí)生物安全柜有四種不同的類(lèi)型(分別為A1、A2、B1 和B2 型),它們不同于Ⅰ級(jí)生物安全柜之處為,只讓經(jīng)HEPA 過(guò)濾的( 無(wú)菌的)空氣流過(guò)工作臺(tái)面。Ⅱ級(jí)生物安全柜可用于操作危險(xiǎn)度2 級(jí)和3 級(jí)的感染性物質(zhì)。在使用正壓防護(hù)服的條件下,Ⅱ級(jí)生物安全柜也可用于操作危險(xiǎn)度4 級(jí)的感染性物質(zhì)。
Ⅱ 級(jí)A1 型生物安全柜
Ⅱ 級(jí)A1 型生物安全柜。內(nèi)置風(fēng)機(jī)將房間空氣(供給空氣) 經(jīng)前面的開(kāi)口引入安全柜內(nèi)并進(jìn)入前面的進(jìn)風(fēng)格柵。在正面開(kāi)口處的空氣流入速度少應(yīng)該達(dá)0.38 m/s。然后,供氣先通過(guò)供風(fēng)HEPA 過(guò)濾器,再向下流動(dòng)通過(guò)工作臺(tái)面。空氣在向下流動(dòng)到, 距工作臺(tái)面大約6~18 cm 處分開(kāi), 其中的一半會(huì)通過(guò)前面的排風(fēng)格柵,而另一半則通過(guò)后面的排風(fēng)格柵排出。所有在工作臺(tái)面形成的氣溶膠立刻被這樣向下的氣流帶走,并經(jīng)兩組排風(fēng)格柵排出,從而為實(shí)驗(yàn)對(duì)象提供的保護(hù)。氣流接著通過(guò)后面的壓力通風(fēng)系統(tǒng)到達(dá)位于安全柜頂部、介于供風(fēng)和排風(fēng)過(guò)濾器之間的空間。由于過(guò)濾器大小不同,大約70%的空氣將經(jīng)過(guò)供風(fēng)HEPA 過(guò)濾器重新返回到生物安全柜內(nèi)的操作區(qū)域,而剩余的30% 則經(jīng)過(guò)排風(fēng)過(guò)濾器進(jìn)入房間內(nèi)或被排到外面。
Ⅱ 級(jí)A1 型生物安全柜排出的空氣可以重新排入房間里,也可以通過(guò)連接到 通風(fēng)管道上的套管或通過(guò)建筑物的排風(fēng)系統(tǒng)排到建筑物外面。
安全柜所排出的經(jīng)過(guò)加熱和∕或冷卻的空氣重新排入房間內(nèi)使用時(shí),與直接排到外面環(huán)境相比具有降低能源消耗的優(yōu)點(diǎn)。有些生物安全柜通過(guò)與排風(fēng)系統(tǒng)的通風(fēng)管道連接,還可以進(jìn)行揮發(fā)性放射性核素以及揮發(fā)性有毒化學(xué)品的操作(表1.)。
外排風(fēng)式Ⅱ級(jí)A2 型以及Ⅱ級(jí)B1 型和Ⅱ級(jí)B2 型生物安全柜
外排風(fēng)式Ⅱ級(jí)A2 型以及Ⅱ級(jí)B1型(圖3.)和Ⅱ級(jí)B2 型生物安全柜都是由Ⅱ級(jí)A1 型生物安全柜變化而來(lái),這些不同類(lèi)型的Ⅱ級(jí)生物安全柜,連同Ⅰ級(jí)和Ⅲ級(jí)生物安全柜的特點(diǎn)見(jiàn)表9。生物安全柜設(shè)計(jì)上的每一種變化可以使不同的類(lèi)型適用于特定的目的(參見(jiàn)表1) 。這些生物安全柜相互間都有一定的差異,包括從前面的開(kāi)口吸入空氣的速度、在工作臺(tái)面上再循環(huán)空氣的量以及從安全柜中排出空氣的量、安全柜的排風(fēng)系統(tǒng)(是通過(guò)專(zhuān)門(mén)的排風(fēng)系統(tǒng)還是通過(guò)建筑物的排風(fēng)系統(tǒng)?是排到房間內(nèi)還是排到建筑物的外面?)以及壓力設(shè)置(安全柜是負(fù)壓狀態(tài)下的生物學(xué)污染管道和壓力通風(fēng)系統(tǒng),還是由負(fù)壓管道和壓力通風(fēng)系統(tǒng)所包圍的生物學(xué)污染管道和壓力通風(fēng)系統(tǒng)?)。
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